木质包装有害生物检疫经验谈

为防止林木有害生物随木质包装材料在国际间传播蔓延，国际植物保护公约组织（IPPC）公布了《国际贸易中的木质包装材料管理准则》，要求木质包装在出境前进行除害处理，并加施IPPC确定的专用标识。目前，欧盟、加拿大、美国、澳大利亚等国家和地区已采纳该标准并于2005年3月1日起陆续开始实施，将来会有更多的国家采用该国际标准。对于不符合国际标准的木质包装，进口国家或地区将在入境口岸采取除害处理、销毁、拒绝入境等措施。我国为保护森林、生态环境及旅游资源，对木质包装也采取了相应的检疫措施。为便于交流，进一步搞好木质包装检疫工作，现将多年来从事进出口木质包装检疫的一些经验介绍如下。     

猪弓形虫病特异PCR诊断方法的建立

以核糖体DNA第一内转录间隔区(ITS1)序列作为弓形虫种特异的遗传标记．建立了猪弓形虫病特异PCR诊断方法。应用人工感染的方法建立了猪弓形虫病动物模型．摸索出猪弓形虫病PCR检测的最佳条件。敏感性和特异性试验结果显示，该PCR方法最低能检测到10个弓形虫速殖子的DNA，且与相关的8种原虫和线虫均无交叉反应，证明该PCR方法具有高度的敏感性和特异性。动物感染试验结果证明．在试验猪出现明显临床症状时(感染后第5d)．对取材的8个组织样品用该PCR方法检测，有6个组织样品为阳性，其中检出率最高的组织为肺门淋巴结。     

猪圆环病毒2型RPA恒温扩增检测方法的建立及初步应用

利用重组酶聚合酶扩增技术(RPA),以猪圆环病毒2型Cap基因的保守序列为靶序列设计并筛选出一组特异性的引物和探针,建立了快速检测猪圆环病毒2型核酸的RPA方法。试验结果表明,该方法特异性强,猪圆环病毒1型(PCV1)、猪伪狂犬病病毒(PRV)、猪细小病病毒(PPV)、猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)、猪瘟病毒(CSFV)核酸检测结果均为阴性,灵敏性高,最低可检出核酸浓度为0. 87×10-4ng/μL,简单快速,且重复性好。利用所建立的RPA方法对183份临床样品进行检测,结果与实时荧光PCR方法符合率为98. 9%。本研究为猪圆环病毒2型核酸的快速检测提供了一种新方法,尤其适合基层实验室或养猪场的快速检测。     

非洲猪瘟病毒实验室诊断方法的研究进展

正非洲猪瘟(African swine fever,ASF)是由非洲猪瘟病毒(ASF virus,ASFV)感染引起的猪的一种急性、烈性、高度传染性疾病,以高热、网状内皮系统出血和高死亡率为特征~([1])。世界动物卫生组织(OIE)将ASF列为法定报告疫病,我国将其列为一类动物疫病~([2])。ASFV是非洲猪瘟病毒科(Asfarviridae)非洲猪瘟病毒属(Asfivirus)的唯一成员,     

猪传染性胃肠炎病毒、猪流行性腹泻病毒和猪轮状病毒A多重荧光定量RT-PCR检测方法的建立

为对引起腹泻症状的猪传染性胃肠炎病毒(TGEV)、猪流行性腹泻病毒(PEDV)和猪轮状病毒A(PRoVA) 3种病毒同时快速地鉴别检测,本研究对GenBank中登录的TGEV的S基因、PEDV的S基因、PRo VA的NSP基因进行序列分析,分别设计了针对3种病毒的特异性引物和用3种荧光基团标记的核酸探针,通过条件优化建立了针对这3种病毒的多重荧光定量RT-PCR方法。结果显示,该方法能够特异性检测PEDV、TGEV和PRo VA,而与其它病原无交叉反应;对TGEV、PEDV和PRo VA的最低检测量分别为1.12拷贝/μL、39拷贝/μL和25拷贝/μL;组内和组间变异系数均小于5%;该方法与商品化的试剂盒检测结果符合率达100%。该方法快速、敏感,检测结果准确可靠,为猪病毒性腹泻疾病的流行病学调查和分子生物学快速诊断奠定了基础。     

鹿流行性出血病病毒实时荧光PCR检测方法的初步建立

利用鹿流行性出血病（EHD）病毒核酸的保守靶序列（VP7）,设计引物和TaqMan荧光探针,建立了EHDV荧光定量RT-PCR技术,并进行了特异性、敏感性、重复性等实验评价。结果显示,该技术可有效检出EHD-1、EHD-2、EHD-4、EHD-7型病毒,与蓝舌病病毒（BTV）等病毒无交叉反应;对阳性模板（重组质粒）的检测灵敏度为1个copies;重复检测CV〈5%。因此,所建立的EHDV TaqMan/荧光定量RT-PCR方法可为鹿流行性出血病病毒检测提供一种快速、可靠的病原检测手段。     

锯木长蠹属4个近似种的鉴别

2011年7月,深圳出入境检验检疫局从阿根廷进口多刺苏木(Caesalpinia spp.)原木中检出我国未有分布记载的林木重要害虫——尖齿锯木长蠹(Xyloprista hexacantha(Fairmaire))。本文介绍了尖齿锯木长蠹、弯齿锯木长蠹(Xyloprista arcellata Lesne)、菲希锯木长蠹(Xyloprista fisheri Rai)、钝齿锯木长蠹(Xyloprista praemorsa Erichson)成虫的形态特征,并列出了这4个种的鉴别特征检索表。     

我国水产苗种产地检疫存在问题及对策

为规范水产苗种产地检疫,2011年3月17日,农业部关于印发《鱼类产地检疫规程（试行）》等3个规程（以下简称规程）的通知,我国水产苗种产地检疫进入了实施阶段,然而,已经落后陆生动物的产地检疫30多年。我国的苗种的产地检疫,主要依托水产技术推广、水产病害防治中心（水生动物防疫站）和水产研究所等单位开展。对此,各地党政领导重视程度、机构设置与管理及养殖水平、防疫水平、地理位置、经济实力等方面存在较大差异。本文针对产地检疫中行政管理、监督执法和技术服务三位一体存在的问题,谈谈开展水产苗种产地检疫的对策。     

非洲猪瘟病毒VP73蛋白在昆虫细胞中的表达与间接ELISA方法的建立

为了建立检测非洲猪瘟病毒(ASFV)间接酶联免疫吸附试验(iELISA),利用杆状病毒表达载体pFastBac HTA在昆虫细胞Sf9中表达非洲猪瘟病毒的VP73蛋白,SDS-PAGE和Western blot检测显示重组蛋白大小约65ku,能与ASFV标准阳性血清发生特异性结合。以此重组蛋白作为检测抗原包被酶标板,初步建立了检测ASFV血清抗体的iELISA方法。表达的重组蛋白具有良好的特异性,为制备ASFV免疫血清学诊断检测试剂和疫苗提供了材料。     

进境冻畜禽产品中产超广谱β-内酰胺酶大肠埃希菌耐药性的监测与分析

为监测进境冻畜禽产品中受产超广谱β-内酰胺酶(ESBL)大肠埃希菌污染的情况,采用ESBL显色平板初筛结合Vitek2 compact确证及药敏测试的方法,经过与美国临床实验室标准化研究所(CLSI)推荐方法(M100-S22)进行比对,并且通过对249份进境冻畜禽产品进行了检测.结果表明,采用的方法与CLSI推荐方法相比,具有快速、准确、操作简便和特异性好等优点,有良好的推广价值.同时,经检测获得产ESBL大肠埃希菌18株,占样品总量的7.23％.所获菌株对氨苄西林、头孢唑啉和头孢曲松高度耐药,多重耐药率为16.67％～38.89％,为检验检疫部门评估进境冻畜产品中受产ESBL大肠埃希菌污染的情况提供了科学数据.